哪些条件影响液相色谱的分离

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初搞色谱总会纠结在这个极性的问题上,事实上,对于是液相色谱分离来说,影响因素太多,远不只是一个极性问题的,虽然至今世界上也没有通用的理论来准确说明分离机理,但有两点因素是最影响分离的,第一个是物质与流动相的极性,第二个叫洗脱能力,这两点都很重要。

了解这两点,你上面的问题就解决了。虽然说极性与洗脱能力是相关的,但用洗脱能力来理解出峰快与慢以及分离效果,用极性来理解出峰顺序,这样就容易理解了。反相色谱一般使用强度因子来表示,一般极性参数大的,强度因子就小,但甲醇与乙腈比较特殊,极性参数甲醇与乙腈分别为5.1与5.8,强度因子却是甲醇3.0,乙腈3.2。所以说象你上面问的“如果流动相极性偏大,是不是分离效果不好?还有就是如果分离度不好,加大水的比例,延长保留时间,会不会影响到分离效果?”可以这样理解,流动相洗脱能力越强分离越不好。而对于反相色谱来说,只有两相,一相是有机相,而另一相是水相。有机相是强洗脱剂,水是弱洗脱剂。当然有机相中的洗脱能力也是有差别的,按THF,ACN,MEOH顺序。而不要用极性去理解,那样太复杂了。

有机相比例越大,洗脱能力越强,水相比例越大,洗脱能力越弱,但越容易分离。

看下表:

甲醇/水 乙腈/水 四氢呋喃/水

10 相当于 6 相当于 4

20 12 10

30 22 17

40 32 23

50 40 30

60 50 37

70 60 45

80 73 53

90 86 63

100 100 72

高效液相色谱的术语和定义如下:

术语:

色谱图,样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号是时间曲线,又称色谱流出曲线。漂移,基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。峰面积,峰与峰底所包围的面积。

分离度(resolution,R),相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程度。R≥1.5称为完全分离。理论塔板数(theoretical plate number,N),用于定量表示色谱柱的分离效率(简称柱效)。峰底,基线上峰的起点至终点的距离。

定义:

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography\HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等,其统称来说即为高柱效、高压力、高效率的液相色谱。

高效液相色谱的分离原理:

1、液固

流动相为液体,固定相为吸附剂(如硅胶、氧化铝等)。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是:当试样进入色谱柱时,溶质分子(X)和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附(未进样时,所有的吸附剂活性中心吸附的是S)。

2、离子对

离子对色谱法是将一种(或多种)与溶质分子电荷相反的离子(称为对离子或反离子)加到流动相或固定相中,使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物,从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示:X水相Y-水相===X Y-有机相。

式中:X水相是流动相中待分离的有机离子;Y水相是流动相中带相反电荷的离子对;X Y是形成的离子对化合物。离子对色谱法解决了以往难以分离的混合物的分离问题,诸如酸、碱和离子、非离子混合物,特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。

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  • 努力啊大安蕾的头像
    努力啊大安蕾 2025年12月10日

    我是育友号的签约作者“努力啊大安蕾”

  • 努力啊大安蕾
    努力啊大安蕾 2025年12月10日

    本文概览:网上有关“哪些条件影响液相色谱的分离”话题很是火热,小编也是针对哪些条件影响液相色谱的分离寻找了一些与之相关的一些信息进行分析,如果能碰巧解决你现在面临的问题,希望能够帮助到您...

  • 努力啊大安蕾
    用户121010 2025年12月10日

    文章不错《哪些条件影响液相色谱的分离》内容很有帮助